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<title>ONPG-Test</title>
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<h1 id="firstHeading" class="firstHeading mw-first-heading"><span class="mw-page-title-main">ONPG-Test</span></h1>
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</div>
<div id="mw-content-text" class="mw-body-content mw-content-ltr" lang="de" dir="ltr"><div class="mw-content-ltr mw-parser-output" lang="de" dir="ltr"><p>Der <b>ONPG-Test</b> (Abk. für <u><i>o</i></u>-<u>N</u>itro<u>p</u>henyl-β-<small>D</small>-<u>g</u>alactopyranosid-Test) ist ein biochemischer Nachweis für das <a href="Enzym" title="Enzym">Enzym</a> <a href="%CE%92-Galactosidase" title="Β-Galactosidase">β-Galactosidase</a>. Die Hydrolyse des synthetischen Substrates <a href="O-Nitrophenyl-%CE%B2-D-galactopyranosid" title="O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid"><i>o</i>-Nitrophenyl-β-<small>D</small>-galactopyranosid</a> (ONPG) durch eine β-Galactosidase wird in der mikrobiologischen <a href="Diagnostik" class="mw-redirect" title="Diagnostik">Diagnostik</a> eingesetzt, um <a href="Bakterien" title="Bakterien">Bakterien</a>, zum Beispiel aus der Gattung der <i><a href="Burkholderia" title="Burkholderia">Burkholderia</a></i>, <a href="Salmonellen" title="Salmonellen">Salmonellen</a> und <a href="Nocardien" class="mw-redirect" title="Nocardien">Nocardien</a>, anhand ihrer β-Galactosidase-Aktivität voneinander zu unterscheiden.<sup id="cite_ref-1" class="reference"><a href="#cite_note-1"><span class="cite-bracket">[</span>1<span class="cite-bracket">]</span></a></sup><sup id="cite_ref-2" class="reference"><a href="#cite_note-2"><span class="cite-bracket">[</span>2<span class="cite-bracket">]</span></a></sup>
</p>
<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Grundlagen">Grundlagen</h2></div>
<p>Einige Bakterien besitzen das Enzym β-Galactosidase, das es ihnen ermöglicht den <a href="Zweifachzucker" class="mw-redirect" title="Zweifachzucker">Zweifachzucker</a> <a href="Lactose" title="Lactose">Lactose</a> zu verstoffwechseln.
Beim ONPG-Test ersetzt das synthetische <a href="Galactosid" class="mw-redirect" title="Galactosid">Galactosid</a> <i>o</i>-Nitrophenyl-β-D-galactopyranosid das natürliche Substrat der β-Galactosidase. ONPG wird wie Lactose durch die Galactosid-Permease in die Zelle hineingebracht und durch die β-Galactosidase hydrolysiert. Hierbei entstehen die beiden Reaktionsprodukte <a href="Galactose" title="Galactose">Galactose</a> und <a href="Nitrophenol" class="mw-redirect" title="Nitrophenol"><i>o</i>-Nitrophenol</a>. Letzteres verursacht eine gelbe Verfärbung der Testlösung bei positiven Proben.
</p>
<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Durchführung"><span id="Durchf.C3.BChrung"></span>Durchführung</h2></div>
<p>Für jede Probe werden in ein steriles Röhrchen je eine ONPG-Scheibe und etwa 200 µl der sterilen Kochsalzlösung hinzugegeben, so dass sich die ONPG-Scheibe vollständig unter der sterilen Kochsalzlösung befindet. Anschließend werden etwa 1 bis 3 Kolonien des zu untersuchenden Bakteriums von einem festen Nährmedium (Agarplatte/Primärkultur) mit Hilfe eines sterilen Stabes in der sterilen Kochsalzlösung suspendiert. Das Röhrchen mit dem Ansatz inkubiert man dann bei 36 ± 1 °C für maximal 24 Stunden und beobachtet, ob sich eine Farbveränderung der Suspension einstellt.
</p>
<div class="mw-heading mw-heading3"><h3 id="Auswertung">Auswertung</h3></div>
<p>Die Ablesung des Testes erfolgt nach etwa 1, 6 und ggf. 24 Stunden. Eine Gelbfärbung der physiologischen Kochsalzlösung zeigt einen positiven ONPG-Test an. Keime, die nach 6 Stunden keine positive Farbveränderung zeigen, sollten bis zu 24 Stunden weiter inkubiert werden. Bleibt die Gelbverfärbung aus, spricht dies für ein negatives Testergebnis.
</p>
<table class="wikitable">
<tbody><tr>
<th>ONPG-positive Bakterien
</th>
<th>ONPG-negative Bakterien
</th></tr>
<tr>
<td><i><a href="Burkholderia_cepacia" title="Burkholderia cepacia">Burkholderia cepacia</a></i>
</td>
<td><i>Burkholderia stabilis</i>
</td></tr>
<tr>
<td><i>Burkholderia multivorans</i>
</td>
<td>
</td></tr>
<tr>
<td><i>Burkholderia vietnamiensis</i>
</td>
<td>
</td></tr>
<tr>
<td><i><a href="Burkholderia_gladioli" title="Burkholderia gladioli">Burkholderia gladioli</a></i>
</td>
<td>
</td></tr>
</tbody></table>
<p>Da der ONPG-Test zu <a href="Falsch_positiv" class="mw-redirect" title="Falsch positiv">falsch positiven</a> Ergebnissen führen kann, wird bei der Diagnose von <a href="Staphylokokken" title="Staphylokokken">Staphylokokken</a> gelegentlich alternativ ein Nachweis der β-Galactosidase mit <a href="X-Gal" class="mw-redirect" title="X-Gal">X-Gal</a> durchgeführt.<sup id="cite_ref-3" class="reference"><a href="#cite_note-3"><span class="cite-bracket">[</span>3<span class="cite-bracket">]</span></a></sup>
</p>
<div class="mw-heading mw-heading2"><h2 id="Einzelnachweise">Einzelnachweise</h2></div>
<ol class="references">
<li id="cite_note-1"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-1">↑</a></span> <span class="reference-text">R. De Ryck, M. J. Struelens, E. Serruys: <i>Rapid biochemical screening for Salmonella, Shigella, Yersinia, and Aeromonas isolates from stool specimens.</i> In: <i>Journal of Clinical Microbiology.</i> Band 32, Nummer 6, Juni 1994, S. 1583–1585, <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8077408?dopt=Abstract">PMID 8077408</a>. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC264043/">PMC 264043</a> (freier Volltext).</span>
</li>
<li id="cite_note-2"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-2">↑</a></span> <span class="reference-text">M. Flores, E. G. Ford, J. M. Janda: <i>Value of the O-nitrophenyl-beta-D-galactopyranoside test to differentiate among the aerobic actinomycetes.</i> In: <i>Journal of Clinical Microbiology.</i> Band 28, Nummer 9, September 1990, S. 2142–2144,. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2121796?dopt=Abstract">PMID 2121796</a>. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC268125/">PMC 268125</a> (freier Volltext).</span>
</li>
<li id="cite_note-3"><span class="mw-cite-backlink"><a href="#cite_ref-3">↑</a></span> <span class="reference-text">H. Tse, E. Chan, C. W. Lam, K. F. Leung, P. Chow, K. C. Lee, K. H. Sze, S. K. Cheung, M. K. Tse, P. L. Ho, S. P. Leung, S. K. Lau, P. C. Woo, K. Y. Yuen: <i>Production of 2-aminophenoxazin-3-one by Staphylococcus aureus causes false-positive results in ?-galactosidase assays.</i> In: <i>Journal of Clinical Microbiology.</i> Band 50, Nummer 11, November 2012, S. 3780–3782, <a href="Digital_Object_Identifier" title="Digital Object Identifier">doi</a>:<span class="uri-handle" style="white-space:nowrap"><a rel="nofollow" class="external text" href="https://doi.org/10.1128/JCM.02299-12">10.1128/JCM.02299-12</a></span>. <a class="external mw-magiclink-pmid" rel="nofollow" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22972831?dopt=Abstract">PMID 22972831</a>. <a rel="nofollow" class="external text" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3486264/">PMC 3486264</a> (freier Volltext).</span>
</li>
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